INFORMATIONS POUR MÉDECINS

natto NKCP



PROPRIÉTÉS DU NATTO NKCP

    • NKCP est exempt de l'odeur caractéristique et de la texture visqueuse du natto de B. subtilis.
    • Comme la vitamine K2 a été largement éliminée, elle est moins antagoniste à d'autres médicaments tels que la warfarine.
    • Le corps des cellules bactériennes a été supprimé.
    • Le NKCP a été ajusté pour contenir une quantité fixe de protéine fonctionnelle (bacillopeptidase F) capable de dégrader les peptides. Son activité peut être confirmée par un dosage quantitatif de la protéine fonctionnelle.
    • La protéine fonctionnelle contenue dans le NKCP est stable à pH 6,0-10,0 et à une température inférieure à 60°C.
    • Trois fonctions ont été confirmées par plusieurs études, 1 action de prévention de la formation de thrombus, 2 actions de lyse des caillots sanguins, et 3 action de diminution de la viscosité du sang (c'est l'objet d'une demande de brevet concernant le NKCP comme agent de réduction de la viscosité du sang [JP2004331559]).
    • La sécurité du NKCP a été confirmée dans de nombreuses études animales et humaines.
    • Le filtrat purifié de la culture de B. subtilis natto et son procédé de production sont enregistrés sous le brevet n° 3532503.

L'ingrédient fonctionnel du NKCP responsable de la réduction du risque de thrombose est une peptidase sécrétée par le natto Bacillus (B. subtilis natto). Cette peptidase est l'une des protéines contenues dans le natto que nous, Japonais, ingérons quotidiennement. L'activité de la peptidase peut être vérifiée par sa promotion de l'hydrolyse en utilisant un substrat synthétique pour la plasmine ou la fibrine artificielle. L'activité thrombolytique améliorée du natto et du produit partiellement purifié obtenu à partir de la fermentation du natto de Bacillus subtilis a été démontrée dans des études sur l'homme et le chien.

Le NKCP possède une activité peptidase stable et son principal ingrédient actif est une protéine de 34 000-45 000 daltons sécrétée par B. subtilis natto, appartenant à la sérine protéase. L'activité est stable à un pH de 6,0 à 10,0 et le pH optimal est de 9,0. NKCP est stable en dessous de 60°C. L'activité peptidase est mesurée en déterminant la capacité d'hydrolyser un substrat synthétique hautement spécifique pour la plasmine (S-2251), et sa détermination quantitative est effectuée par ELISA, en mesurant la quantité d'antigène réagissant avec un anticorps spécifique pour le fragment de bacillapeptidase F.

                                                                                              

1.        Journal of Bacteriology, Vol. 172, pp. 1019-1023, 1990

2.        The Journal of Biological Chemistry, Vol.265, pp.6845-6850, 1990

3.        The Journal of Bacteriology, Vol.172, pp.1470-1477, 1990

4.        Sumi, et al., Experientia, Vol. 43, pp. 1110-1111, 1987

5.        The Journal of Biological Chemistry, Vol.276, pp.24690-24696, 2001

6.        Mol Gen Genet 1990 May; 221 (3):486-490

Mécanisme d'action 

L'effet thrombolytique de NKCP a été démontré par des études in vitro et in vivo. En ajoutant du NKCP, l'inactivation de l'inhibiteur de l'activateur du plasminogène (PAI-1) et la réduction de la viscosité du sang sont observées dans des études in vitro.

Comme le montre la figure suivante, l'ingestion de NKCP réduit l'inhibiteur de l'activateur du plasminogène et aide l'activateur du plasminogène à travailler efficacement. L'activateur tissulaire du plasminogène (t-PA) active la plasmine et réduit le fibrinogène et le caillot de fibrine. Ainsi, les NKCP induisent l'activation de la cascade de fibrinolyse en réduisant le PAI-1

                                                                                                            

Données scientifiques sur la fonctionnalité du NKCP

Action anti-thrombose 

Effet anti-thrombose du NKCP chez le rat

Daiwa Pharmaceutical, département recherche et développement 

Une étude comparative a été menée pour évaluer l'anti-thrombose du NKCP par la méthode de l'anse in situ en utilisant un modèle de thrombose. La thrombose a été induite par une blessure dans les cellules endothéliales de l'aorte descendante abdominale. Six heures après l'induction de la thrombose, le temps de thromboplastine partielle activée (TCA) et le temps de prothrombine (TP) ont été mesurés comme indicateurs de l'activité de coagulation du sang.  

Les valeurs du TCA pour le groupe témoin, le groupe NKCP 100mg/kg et le groupe 250mg/kg étaient respectivement de 33,5+2,4 sec, 52,0±4,5 sec et 63,3+2,9 sec, indiquant une prolongation significative pour NKCP. Les valeurs du temps de Quick pour le groupe contrôle, NKCP 100mg/kg et 250mgglkg étaient respectivement de 16,7±0,5 sec, 20,6+0,9 sec et 21,3+1,7 sec, ce qui indique un résultat similaire pour le TCA. Puisque NKCP a montré une prolongation significative du TCA et du TP, comme indiqué ci-dessus, son rôle possible dans l'inhibition de la formation de caillots a été suggéré.2/ Action of anti-thromboses.

                                                                                                                                                                                                                           

Données scientifiques sur le NKCP

Effet thromolytique in vivo de NKCP oral dans un modèle expérimental de thrombose chez le rat.

Laboratoire de physiologie, Faculté de nutrition, Université de Kobe Gakuin

L'activité thrombolytique du NKCP après 14 semaines d'administration d'un aliment standard (MF) contenant 0,2% de NKCP a été évaluée dans des modèles expérimentaux de thrombolyse chez le rat pour un caillot de sang artériel principalement constitué de plaquettes en utilisant des microvaisseaux mésentériques. Le groupe NKCP a montré une augmentation de l'activité thrombolytique par rapport au groupe MF. L'activité thrombolytique de 0,2% de NKCP correspond à 0,2 mg/kg d'activateur tissulaire du plasminogène (t-PA).


                                             

Relation entre l'ingestion de NKCP et son effet chez l'homme

Rapport de Daiwa Pharmaceutical 

L'efficacité et l'innocuité du NKCP ont été évaluées chez 40 volontaires adultes en bonne santé par l'administration orale quotidienne de NKCP d'une dose de 125 mg par jour à une dose de 1000 mg par jour. Les sujets ont administré le NKCP pendant 3 semaines. Divers tests cliniques de laboratoire ont été effectués pour déterminer la dose recommandée en utilisant le temps de lyse de l'euglobuline (ELT) comme principal indicateur. À la dose de 250 mg par jour ou plus, l'administration de NKCP a montré une activité stable après le quatrième jour.

                                                                                                             


Effet anti-thrombose/fibrinolytique du NKCP

La 26ème réunion de la Société japonaise de Biorhéologie 2003, médecine de l'université Dokkyo, département de médecine légale 

NKCP a été préparé pour hydrolyser le S-2251, un substrat synthétique spécifique de la plasmine à 10U/mg. Une solution de NKCP dans du sérum physiologique a été ajoutée à du sang humain immédiatement après le prélèvement pour mesurer les valeurs de laboratoire cliniques liées à la coagulation/fibrinolyse. En conséquence, le NKCP a diminué à la fois la concentration du complexe thrombine-antithrombine III (TAT) et du monomère de fibrine (FM), montrant ainsi qu'il a une action anticoagulante comme l'héparine. En outre, la concentration de D-dimère (D-d) était élevée et celle de fibrinogène (Fbn) était faible, ce qui montre qu'il a un effet fibrinolytique comme l'alteplase. Cependant, contrairement à l'alteplase, l'effet fibrinolytique n'était accompagné d'aucune augmentation de la concentration du complexe α2 inhibiteur de la plasmine - plasmine (PIC), ce qui suggère que l'effet fibrinolytique est indépendant de la plasmine.

Plus la concentration de NKCP était élevée, plus l'effet devenait important. Ces résultats ont démontré que le nouvel extrait de la fermentation du natto a un effet anticoagulant et un effet fibrinolytique indépendant de la plasmine sur le sang humain.

                                                                                                   


Action de diminuer la viscosité du sang

 Effet du NKCP sur la viscosité du sang

Journal de la société japonaise d'Hémorhéologie Vol. 5 (1), 2002

Le NKCP a été administré à 13 volontaires adultes sains pendant une semaine afin de mesurer le temps de lyse de l'euglobine (ELT) comme indicateur de l'activité fibrinolytique. Un volontaire adulte en bonne santé, qui a pris 1 000 mg de NKCP par jour en continu après les repas, a montré un temps de passage du sang total remarquablement raccourci, déterminé par un analyseur de flux à réseau de micro-canaux (MC- FAN) au jour 7 ou plus tard.

Effet de NKCP sur l'amélioration de la fluidité du sang total

Prise : 1g après chaque repas (capsule dure avec enrobage entérique) Période de prise : 2 semaines

Méthode de mesure : Mesure du temps de passage du sang total dans des modèles capillaires avec MC FAN



Étude sur la viscosité du sang chez les volontaires

École de médecine de l'université Dokkyo, département de médecine légale 

Quatorze volontaires sains, un groupe témoin de 6 hommes et un groupe NKCP de 8 hommes ont reçu respectivement un placebo et 1 250 mg de NKCP. La viscosité du sang a été mesurée successivement jusqu'à 240 minutes après l'administration.

La viscosité du sang a été mesurée à l'aide d'un viscosimètre de type vibratoire capable de mesurer le changement de viscosité du caillot sanguin en temps réel sans ajouter d'anticoagulant. En conséquence, une diminution de la viscosité du sang a été observée principalement 180 minutes après l'administration de NKCP. La viscosité du sang à 180 minutes était significativement plus faible que dans le groupe témoin.

                                                                                                                

Stabilité au stockage

La poudre NKCP a été examinée pour déterminer les changements dans la teneur en protéines produites par le bacille natto et l'activité bacillopeptidase pendant le stockage. Les changements dans l'activité bacillopeptidase de la poudre NKCP étaient de +5% ou moins lorsqu'elle était stockée à 25°C ou 37°C pendant 6 mois.

Aucune modification du contenu et de l'activité n'a été observée après 6 mois de stockage à 37°C ou 24 mois de stockage à température ambiante.

                                                                                                                                           


Stabilité à la chaleur

Une solution de 1g de NKCP dans 10ml de tampon d'acide tris-hydrochlorique 50m mol/L (contenant 100m mol/L de NaCl, pH 9.0) a été utilisée dans un test de stabilité à la chaleur pour l'activité bacillopeptidase. La solution de NKCP, traitée à différentes températures et durées, a été examinée pour déterminer le taux résiduel de l'activité bacillopeptidase de la protéine produite par B. subtilis natto en utilisant un substrat chromatogène synthétique, S-2251. Comme le montre la figure ci-dessous, la bacillopeptidase dans le NKCP était stable lorsqu'elle était chauffée jusqu'à 60°C.

                                                                                                                                              

SÉCURITÉ D'UTILISATION

Aucun problème de sécurité ou de contre-indication n'a été signalé à ce jour concernant la NKCP Nattokinase. S'agissant d'un extrait d'un aliment traditionnel, la prise de ce produit est très sûre. Nous vous conseillons toutefois de consulter votre médecin avant de prendre la nattokinase NKCP si vous avez un problème médical particulier ou si vous prenez des médicaments sur ordonnance (notamment des médicaments relatifs à la thrombose ou à la circulation sanguine). Plus de 14 études de sécurité ont été réalisées avec le NKCP, et toutes ne montrent absolument aucun problème de sécurité ou de toxicité. Huit de ces études sont résumées ci-dessous:

                                                                                                   

Sur la base des évaluations de l'efficacité et des tests de surdosage chez l'homme, 125-500 mg de natto NKCP sont recommandés comme dose standard par jour.

SPÉCIFICATION

                                                                                                  

ACTIVITÉ - Mesurer l'activité de Natto NKCP

L'efficacité des produits à base d'extrait de Natto est souvent difficile à comparer car il n'existe pas de test standard pour les produits qui aident à optimiser la viscosité du sang. De nombreuses entreprises qui commercialisent des composés de nattokinase mesurent l'activité enzymatique de leur produit en unités fibrinolytiques (FU), ce qui laisse supposer que l'efficacité de ces suppléments enzymatiques réside uniquement dans le degré auquel ils peuvent briser la fibrine. Cette hypothèse est toutefois trompeuse, car :

La fibrinolyse n'est qu'une des activités in vitro de la nattokinase. In vivo, elle peut avoir des activités et des fonctions différentes.

La fibrine est une protéine insoluble et ne permet pas la formation de suspensions ou de plaques uniformes. Cela la rend inadaptée comme substrat pour la quantification de l'activité enzymatique. Elle ne doit donc être utilisée comme substrat que pour une analyse qualitative.

Les suspensions ou plaques de fibrine ont une structure en réseau, et il n'est donc pas clair si l'activité enzymatique est associée à la dégradation de la structure en réseau ou à celle des monomères de fibrine.

Lorsque la fibrine est utilisée comme substrat, la réaction se déroule de manière logarithmique en fonction de la concentration de l'enzyme. Ainsi, une courbe standard linéaire n'est pas obtenue, ce qui entraîne un problème de précision.

Lorsque la fibrine est utilisée comme substrat, la réactivité est susceptible de varier en fonction des enzymes utilisées. Comme il existe plusieurs types de nattokinase, il est nécessaire de disposer d'étalons pour tous ces types. (L'analyse actuelle est basée sur un certain produit standard d'origine inconnue).

Pour ces raisons, au lieu de donner l'activité du NKCP en FU, Daiwa utilise deux autres méthodes pour déterminer l'activité, ce qui permet une évaluation beaucoup plus précise de leur produit :

Méthode de détermination de l'activité peptidase

L'échantillon est incubé à 37°C pendant 5 minutes avec le substrat chromogène synthétique S-2251 (dihydrochlorure de H-D-valyl-L-leucyl-L-lysine-p-nitroanilide) comme substrat et le PNA, qui est libéré par hydrolyse, est déterminé en mesurant l'absorbance à 405 mm. L'activité peptidase (unité/gm) est définie comme étant de 1 unité lorsque 1nmol d'ANP par minute est libéré du substrat de 2mM S-2251 à 37°C par 1gm NKCP.

Méthode de détermination des ingrédients fonctionnels (méthode de mesure des antigènes)

La protéine produite par le bacille natto responsable de l'activité peptidase du NKCP est purifiée pour préparer des anticorps spécifiques des lapins et des souris. La quantité d'antigène réagissant avec les anticorps spécifiques de NKCP est déterminée par la méthode ELISA en sandwich. Les ingrédients fonctionnels sont représentés en μg/g ou en mg/kg.